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技術(shù)文章 / article
談?wù)凞MEM細(xì)胞培養(yǎng)基在使用中有哪些需要注意的地方
2021-10-28 瀏覽次數(shù)：1738
今天小編給大家積極DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基的使用注意事項(xiàng)：
加水：打開(kāi)鍋蓋，向鍋內(nèi)加水到水位線(xiàn)。立式消毒鍋用已煮開(kāi)過(guò)的水，以便減少水垢在鍋內(nèi)的積存。注意水要加夠，防止過(guò)程中干鍋。
裝料、加蓋：材料放好后，關(guān)閉器蓋，采用對(duì)角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋，使蒸汽鍋密閉，勿使漏氣。
排氣:打開(kāi)排氣口,用電爐加熱，待水煮沸后，水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出，當(dāng)有大量蒸汽排出時(shí)，維持5分鐘，使鍋內(nèi)冷空氣*排凈。
升壓、保壓和降壓：當(dāng)鍋內(nèi)冷空氣排凈時(shí)，即可關(guān)閉排氣閥，壓力開(kāi)始上升。當(dāng)壓力上升至所需壓力時(shí)，控制電壓以維持恒溫，并開(kāi)始計(jì)算時(shí)間，待時(shí)間達(dá)到要求(一般培養(yǎng)基和器皿控制在121攝氏度，20分鐘)后，停止加熱，待壓力降至接近“0”時(shí)，打開(kāi)放氣閥。注意不能過(guò)早過(guò)急地排氣，否則會(huì)由于瓶?jī)?nèi)壓力下降的速度比鍋內(nèi)慢而造成瓶?jī)?nèi)液體沖出容器之外。
后的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基空白培養(yǎng)：后放于37攝氏度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，經(jīng)24小時(shí)培養(yǎng)無(wú)菌生長(zhǎng)，可保存?zhèn)溆?斜面培養(yǎng)基取出后，立即擺成斜面后空白培養(yǎng);半固體的培養(yǎng)基垂直放置凝成半固體深層瓊脂后，空白培養(yǎng)。
干熱法：通過(guò)使用干熱空氣殺滅微生物的方法叫干熱。一般是把待的物品包裝就緒后，放入電烘箱中烘烤，即加熱至160至170攝氏度維持1至2銷(xiāo)售。
干熱法常用于空玻璃器皿、金屬器具的。凡帶有膠皮的物品，液體及固體培養(yǎng)基等都不能用此法。
前的準(zhǔn)備：玻璃器皿等在前須經(jīng)正確包裹和加塞，以保證玻璃器皿于后不被外界雜菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用紙包扎或裝在金屬平皿筒內(nèi);三角瓶在棉塞與瓶口外再包以厚紙，用棉繩以活結(jié)扎緊，以防后瓶口被外部雜菌所污染;吸管以拉直的曲別針一端放在棉花的中心，輕輕捅入管口，松緊須適中，管口外露的棉花纖維統(tǒng)一通過(guò)火焰燒去，時(shí)將吸管裝入金屬管筒內(nèi)進(jìn)行，也可用紙條斜著從吸管包起，逐步向上卷，頭端的紙卷捏扁并擰幾下，再將包好的吸管集中。
干燥箱：將包扎好的物品放入干燥烘箱內(nèi)，注意不要擺放太密，以免妨礙空氣流通;不得使器皿與烘箱的內(nèi)層底板直接接觸。將烘箱的溫度升至160至170攝氏度并恒溫1至2小時(shí)，注意勿使溫度過(guò)高，超過(guò)170攝氏度，器皿外包裹的紙張、棉花會(huì)被烤焦燃燒。如果是為了烤干玻璃器皿，溫度為120攝氏度持續(xù)30分鐘即可。溫度降至60至70攝氏度時(shí)方可打開(kāi)箱門(mén)，取出物品，否則玻璃器皿會(huì)因驟冷而爆裂。 用此法時(shí)，不能用油、蠟紙包扎物品。
火焰：直接用火焰灼燒，迅速。對(duì)于接種環(huán)，接種針或其它金屬用具，可直接在酒精燈火焰上燒至紅熱進(jìn)行。此外，在接種過(guò)程中，試管或三角瓶口，也采用通過(guò)火焰而達(dá)到的目的。
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