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技術文章 / article
使用胰酶時，有哪些注意事項
2021-12-24 瀏覽次數：2613
胰酶的作用原理是什么呢？
胰酶是一種蛋白酶，酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細胞膜上和培養皿結合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時細胞在自身內部細胞骨架的張力以及培養液表面張力的作用下成為球形。
使用胰酶時需注意哪些細節問題？
在使用胰酶（Trypsins）細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差，做流式時的CD Marker也可能會下降。胰酶進行分裝時盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因為冷凍保存時液體體積會膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復凍融會降低消化效果并可能造成污染。胰酶適用于消化細胞間質較少的軟組織和傳代細胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對于纖維性組織和較硬的癌組織效果較差。胰酶消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關。
注意：不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才表示消化好了。
一般肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙狀移動就可以了，這時就應該停止消化。
如何選擇正確的細胞消化試劑？
EDTA和胰蛋白酶各有什么作用呢？
許多人不用胰蛋白酶，只用EDTA，或者用胰蛋白酶/EDTA聯合作用。胰酶切割ECM（負責粘連和附著的蛋白），而EDTA通過螯合Ca2+，抑制Integrin的貼壁活性，所以EDTA的作用更加溫和。
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