培養細胞時如何正確的使用胎牛血清

牛血清是細胞培養中常用的天然培養基，與合成的基礎培養基配合使用，一般添加使用量在10~20%，主要作用是提供細胞生長所需的營養物質、激素和生長因子等。

養過細胞的小伙伴們應該都知道：血清，由于其復雜的內在成分和難以控制的外界因素，它既是細胞生長的營養，也是細胞死亡的“致命du藥"，當我們廢寢忘食的，嘔心瀝血的，鞠躬盡瘁的養著細胞同時，也極有可能因為一時的疏忽和大意選擇了品質不好的血清，導致珍貴的細胞意外身外，一切歸零，不得不重頭開始!

血清質量的差異性大

市場上各種血清產品魚龍混珠，一不小心，你可能就使用了品質不好的血清。

血清按照采血時間可分為胎牛血清、新生牛血清和小牛血清，三者的優劣順序為：胎牛血清>新生牛血清>小牛血清。

一般細胞建議使用胎牛血清培養，部分細胞可使用新生牛血清培養，小牛血清則不建議用于細胞培養。

血清在生產中受采血來源，條件和生產工藝等的影響，質量差異較大，即使相同廠家不同批次的血清都會有差異;另外不同種類的細胞對血清的適應也有不同，這可能與血清中所含的生長因子有關，所以血清在使用之前應提前驗證一下對所培養的細胞生長的促進作用。

血清的正確保存及使用指南

1）保存：胎牛血清一般在-20℃以下冷凍保存，使用之前應先放到2~8℃冰箱過夜溶解，不建議直接放到室溫或37℃水浴溶解(升溫過快會導致血清中蛋白質大量沉淀，影響血清質量);若一次使用量不多，可溶解后分裝至小包裝凍存，避免反復凍融。血清解凍后在2~8℃保存時間一般不超過一個月。

2）滅活：一般血清使用時不需要滅活。滅活的作用是消除血清中的各種補體成分，但事實證明血清滅活之后會產生大量的沉淀，會對血清的營養物質造成較大破壞，對細胞的生長不利。

3）沉淀：血清中的沉淀一般為析出的纖維蛋白，另外新生牛血清中各種蛋白含量明顯偏高，溶解時較易產生大量沉淀。血清中出現沉淀一般不會影響血清質量，并且升溫至37℃時會溶解(不建議加熱血清);若沉淀量較多，可在400×g離心3min，取上清使用。血清和添加了血清的培養基在使用時不需要過濾。

血清使用中的一些問題

1）如何更換使用血清？

需要更換使用不同品牌或批次的血清之前，需提前對要使用的血清進行驗證，可使用自己經常培養的細胞進行，保證該血清對細胞生長的促進作用。在更換使用時可以將要更換的血清和原本使用的血清1:1混合使用1~2代，待細胞*適應后進行更換。

2） 血清顏色的問題

血清顏色主要是黃色或紅色，一般淡黃色或微紅色為正常。這個主要受血紅蛋白含量的影響，若顏色太深(接近培養基的顏色)，則有可能是采血過程中出現溶血導致的。

3）血清沉淀的問題

血清中的沉淀主要是纖維蛋白凝集產生的，一般來說每次凍融都會產生一部分的沉淀，但不影響血清質量和使用。另外，血清在加入到培養基中后也是有可能會產生沉淀的，特別是滅活后的血清，會持續產生黑色顆粒，這可能會被錯誤判斷為污染。一般血清產生的沉淀在顯微鏡下觀察為微小的不規則絮狀或者顆粒物質，排查是否為污染好的辦法是用瓊脂板檢測。