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技術(shù)文章 / article
原代細(xì)胞的提取方法詳細(xì)步驟
2022-03-24 瀏覽次數(shù)：1718
原代細(xì)胞是通過一定的方法如酶法或機(jī)械法或生長法使細(xì)胞從人體和動物的母體器官、組織或液體中分離出來，并在受控環(huán)境條件下分離的細(xì)胞在體外或其他人體和動物體內(nèi)生長。
原代細(xì)胞的提取方法詳細(xì)步驟：
1)整個(gè)操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺下進(jìn)行，所有的器材要高壓消毒。
2)根據(jù)BALB/c小鼠的體重，用10ml/kg3%濃度的戊ba比妥鈉麻醉；將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi)，這一步不僅可以消毒，也可以讓小鼠體毛浸濕，后續(xù)剃去皮毛的時(shí)候不會沾到剪刀或組織上。
3)用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟，裝有PBS的注射器插入心尖，同時(shí)在右心耳處剪開一個(gè)小口，緩慢推動注射器，隨著心臟的跳動，將體內(nèi)的血液沖洗出來。
4)取出小鼠的肺部組織，將肺組織切成小米粒樣的大小，置于預(yù)冷的HBSS中反復(fù)沖洗幾次。
5)將小米粒大小的肺組織置于培養(yǎng)瓶中（培養(yǎng)瓶前一天用1%明膠溶液包被培養(yǎng)面，4度過夜，小鼠處理前，將培養(yǎng)瓶放置培養(yǎng)箱中，使其溫度恢復(fù)至37度），置于培養(yǎng)箱37度的環(huán)境下，消化4個(gè)小時(shí)。
6)消化4小時(shí)后，加入培養(yǎng)基（添加培養(yǎng)基，可以是正常培養(yǎng)時(shí)的2倍量），繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)（繼續(xù)培養(yǎng)的時(shí)間可根據(jù)細(xì)胞貼壁情況適當(dāng)調(diào)整）。
7)24小時(shí)后，取出肺組織，鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，換液。
8)原代細(xì)胞的提取和培養(yǎng)是很慢的過程，一般需等到24小時(shí)后，才能在鏡下看到些許細(xì)胞群，一周到兩周后才會看到鵝卵石樣的排列情況。
9)原代細(xì)胞2-3天換液一次，因?yàn)閮?nèi)皮細(xì)胞生長形成單層時(shí)，會出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象。所以，內(nèi)皮細(xì)胞生長接近單層時(shí)就可以傳代了，不要等到長得非常滿。
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