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        CMK-11-5細胞,CMK-86細胞株收到貨的注意事項

        2017-02-21 瀏覽次數(shù):1487

        CMK-11-5細胞,CMK-86細胞株收到貨的注意事項

         

        規(guī)格:1~3*106細胞/25cm2培養(yǎng)瓶

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        1. 收到細胞株包裹時,請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養(yǎng),或立即冷凍保存(置于-70 ℃,隔夜后,移到液氮)。

        2. 冷凍細胞解凍程序:

        2.1. 依據(jù)細胞株數(shù)據(jù)單之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它之成份和比例,制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之 血清種類,若因?qū)嶒炐枰仨氂兴煌瑫r,務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成, 確定細胞適應(yīng)后,方進行所需之實驗。

        2.2. FBS (fetal bovine serum,胚牛血清),CS (calf serum,小牛血清)和HS (horse serum,馬血清),對細胞而言差異極大,請務(wù)必依據(jù)細胞株資料單之血清種類培養(yǎng)之。

        2.3. 將培養(yǎng)基置于37 ℃ 水槽中回溫,回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管,立即放入37 ℃ 水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿,否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化后,以70 % ethanol 擦拭冷凍管外部, 移入無菌操作臺內(nèi)。

        2.4. 依據(jù)細胞種類和濃度,于無菌操作臺內(nèi)取10 ml 培養(yǎng)基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液,緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基,混合均勻,放入37 ℃,5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

        2.5. 對絕大多數(shù)細胞而言,1 % 以下之冷凍保護劑DMSO,不會對細胞之貼附或活 化有不良影響,不需立刻由解凍細胞中去除, 待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。惟對極少數(shù)因?qū)MSO 敏感或會造成細胞分化之細胞,需 立即去除DMSO 者, 則可將解凍后之細胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中,離心300 xg (約1000 rpm),5 分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將細胞均勻混合后,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,再放入37 ℃,5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。收到T25 flask 細胞時,處理方式為:

        2.5.1. 于寄送過程中,為避免起泡造成細胞脫落死亡,T25 flask 均加滿培養(yǎng)基。請檢查flask 外觀,并于顯微鏡下觀察細胞生長狀況和有無污染現(xiàn)象,若有任何問題,不要打開蓋子,請立即通知細胞實驗室。

        2.5.2. 將原封之T25 flask 靜置于37 ℃,5 % CO2 培養(yǎng)箱中,使細胞回溫至37 ℃,并讓運送過程中少數(shù)脫落的細胞可再附著生長。隔天后,于無菌操作箱內(nèi)取出flask 內(nèi)之培養(yǎng)基,(取出之培養(yǎng)基可以再使用),僅留約5-10ml 培養(yǎng)基于flask 內(nèi),依一般培養(yǎng)方式再將細胞置入培養(yǎng)箱中,或細胞已長滿盤, 則將細胞做傳代培養(yǎng)。

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